الكوثرة المتعددة Multiplex PCR

تقنية تستعمل لتضخيم أكثر من قطعة من DNA او هدف من الشريط القالب في نموذج واحد وفيها يستعمل زوج من البوادئ لكل هدف . والأفضل تصميم بادئ يضخم أكثر من هدف او أكثر من منطقة .وعلى العموم فالبوادئ المستعملة في خليط التفاعل المستعمل تكون ذات درجات حرارة التحام متشابه و GC % لارتباط الحرارة الأولى ودرجة الانصهار بالمحتوى من GC . كما انه يجب الأخذ بنظر الاعتبار طول النواتج المضخمة حتى يمكن التمييز بينها عند فصلها على الهلام . وتعاني التقنية من مشاكل عدة منها :
- البدء الخاطئ نتيجة لعدم الارتباط المتخصص الى DNA المستهدف .
- حدوث مزدوجات للبوادئ المستعملة .
- عدم قابلية فصل قطع DNA المضخم النقي على الهلام اذا كانت حركتها (وبالتالي حجمها ) متشابهة.
وتوجد برامج خاصة لتصميم البوادئ لمثل هذه التقنيات . اذ تقوم بتصميم مجموعة من البوادئ PS) Primer Set) وهذه تستعمل في التطبيقات السريرية والبيئة الميكروبية والكشف عن الاضطرابات الوراثية . ومثل هذه المجاميع من البوادئ تتصف بالمواصفات العامة للبوادئ الأخرى مثل طول توالي البادئ ونواتج التضخيم التي تكون بحدود 100 - 500 قاعدة . وحرارة انصهار البادئ الأيسر والأيمن بالحدود المعروفة الواقعة بين 58 - 65º م والاختلاف بين البادئين يكون بحدود 3 ºم ، والطاقة الحرة لخمس ثمالات في الطرف '3 تكون بحدود 9 كيلوسعرة مول . وفضلا" عن ذلك هناك بعض المؤشرات الأخرى التي يجب ان تؤخذ بنظر الاعتبار في MP PCR وهي وان ذكرت أعلاه الا انه يجب التشديد عليها وهي :
- عدم الازدواج بين البوادئ المستخدمة
- تشابه حرارة الانصهار لكل بادئ
- تخصص البادئ يجب ان يكون عاليا" لتجنب فشل عملية البدء
- تقيد وتحديد حركة المتضخمات (نواتج PCR ) في الهلام لغرض فصل وتنقية النواتج بسهولة .

مواضيع ذات صلة

The Difficulty of Detecting Wild-Type lac Repressor

An Assay for lac Repressor

Proving lac Repressor is a Protein

The Role of Inducer Analogs in the Study of the lac Operon

Background of the lac Operon

Mutagenesis with Chemically Synthesized DNA

Altering Cloned DNA by in vitro Mutagenesis

Footprinting, Premodification and Missing Contact Probing

Megabase Sequencing

DNA Fingerprinting—Forensics

Isolation of Rare Sequences Utilizing PCR

Polymerase Chain Reaction