إن التقنيتين مرتبطتان مع بعضهما وتستخدم لقياس الفعالية الضوئية Optical activity لاسيما أغلب الجزيئات الحياتية تمتاز بكونها غير متناظرة إذ لها فعالية بصرية عند إمرار الضوء المستقطب Polarized light على العينة وهو الضوء الذي يتغير اتجاهه مع الزمن أي عندما يصطدم في الجزيئة فـــي لحظة سوف يتغير عن الضوء في اللحظة الأخرى لكون الجزيئة غير متناظرة. وبالتالـي فأن جهاز ORD يعطي مؤشراً هل أن الجزيئة فعالة بصرياً أم لا بالاعتماد على تناظر أو عدم تناظر الجزيئة (الشكل 6-13). وبعد فترة من الزمن تطور جهاز ORD فبدلاً من تمرير ضوء مستقطب يمرر ضوء بشكل دائري مستقطب Circularly polarized light باستخدام جهاز CD والذي يكون من اليمين الــــى اليسار ثم من اليسار الى اليمين (الشكل 7-13) فعندما تكون الجزيئة متناظرة فلا توجد محصلة امتصاصية بين الاتجاهين ويكون الضوء بالاتجاه اليمين مساوياً باتجاه اليسار أي الفرق صفر. أما عندما تكون الجزيئة غير متناظرة فيوجد فرق بين القراءتين.

إذ ان تقنية CD هي وسيلة لمعرفة مدى التغيرات الحاصلة على التركيب الثانوي والثالثي Secondary and tertiary للبروتين نتيجة للظروف المتغيرة مثل درجة الحرارة والأس الهيدروجيني وظروف الخزن والوقت وتأثير الأشعة أو الارتباط مع مركبات أخرى وهي من أفضل الطرائق لتتبع التغيرات الحاصلة على البروتين من خلال إيجاد مقدار الحلزونية helicity - α في البروتين قبل وبـعد الحدث، ومقدار النسبة المئوية الحلزونية   يمكن إيجاده باستخدام المعادلة الآتية:

 Θ= مقدار الشكل البيضوي.

MRW = معدل وزن البقية للأحماض الأمنية Mean residue weight of amino acid ويكون بقيمة 111.

1 = طول المسار الضوئي في الخلية المستخدمة.

c = تركيز البروتين بوحدة غرام/لتر.

لمإذا تم اختيار قياس ألفا - حلزون في التركيب الثانوي للبروتين ولم يتم اختيار التراكيب الثانوية الأخرى مثل الصفيحة المطوية أو الالتفاف العشوائي؟

الجواب:

 عند تحضير ببتيد متعدد يحتوي على 100% من التراكيب الثانوية المتعددة فأن الامتصاص في جهاز CD يكون بالشكل الأتي:

يلاحظ من الشكل أعلاه إن أفضل منطقة يمكن قياس الامتصاصية هي عند الطول الموجي 208 أو 222 بالنسبة للتركيب الثانوي -ألفا حلزون دون أن يحصل تداخل مع بقية الأنواع الأخرى من التراكيب ويفضل القياس عند طول موجي 222 نانوميتر لان في موقع 208 نانوميتر يوجد امتصاص في الاتجاه المعاكس يلغي هذا الامتصاص فضلاً . عن ان معظم المحاليل المستخدمة لديها امتصاص عند هذا الطول الموجي.

مواضيع ذات صلة

التحليل الطيفي

الإشعاع الكهرومغناطيسي Electromagnetic Radiation

مكونات الجهاز المستخدم في التحليل الالي

طرق التحليل الآلي Instrumental Methods) )

اطياف الاشعة تحت الحمراء

مطياف الفلورة (التألق) Fluorescence spectroscopy

الضوء المستقطب والنشاط الضوئي

الدوران النوعي

البولاريمتر

Electrophoretic Mobility 2

Capillary Electrophoresis 2

Capillary Electrophoresis Instrumentation