النبات
مواضيع عامة في علم النبات
الجذور - السيقان - الأوراق
النباتات الوعائية واللاوعائية
البذور (مغطاة البذور - عاريات البذور)
الطحالب
النباتات الطبية
الحيوان
مواضيع عامة في علم الحيوان
علم التشريح
التنوع الإحيائي
البايلوجيا الخلوية
الأحياء المجهرية
البكتيريا
الفطريات
الطفيليات
الفايروسات
علم الأمراض
الاورام
الامراض الوراثية
الامراض المناعية
الامراض المدارية
اضطرابات الدورة الدموية
مواضيع عامة في علم الامراض
الحشرات
التقانة الإحيائية
مواضيع عامة في التقانة الإحيائية
التقنية الحيوية المكروبية
التقنية الحيوية والميكروبات
الفعاليات الحيوية
وراثة الاحياء المجهرية
تصنيف الاحياء المجهرية
الاحياء المجهرية في الطبيعة
أيض الاجهاد
التقنية الحيوية والبيئة
التقنية الحيوية والطب
التقنية الحيوية والزراعة
التقنية الحيوية والصناعة
التقنية الحيوية والطاقة
البحار والطحالب الصغيرة
عزل البروتين
هندسة الجينات
التقنية الحياتية النانوية
مفاهيم التقنية الحيوية النانوية
التراكيب النانوية والمجاهر المستخدمة في رؤيتها
تصنيع وتخليق المواد النانوية
تطبيقات التقنية النانوية والحيوية النانوية
الرقائق والمتحسسات الحيوية
المصفوفات المجهرية وحاسوب الدنا
اللقاحات
البيئة والتلوث
علم الأجنة
اعضاء التكاثر وتشكل الاعراس
الاخصاب
التشطر
العصيبة وتشكل الجسيدات
تشكل اللواحق الجنينية
تكون المعيدة وظهور الطبقات الجنينية
مقدمة لعلم الاجنة
الأحياء الجزيئي
مواضيع عامة في الاحياء الجزيئي
علم وظائف الأعضاء
الغدد
مواضيع عامة في الغدد
الغدد الصم و هرموناتها
الجسم تحت السريري
الغدة النخامية
الغدة الكظرية
الغدة التناسلية
الغدة الدرقية والجار الدرقية
الغدة البنكرياسية
الغدة الصنوبرية
مواضيع عامة في علم وظائف الاعضاء
الخلية الحيوانية
الجهاز العصبي
أعضاء الحس
الجهاز العضلي
السوائل الجسمية
الجهاز الدوري والليمف
الجهاز التنفسي
الجهاز الهضمي
الجهاز البولي
المضادات الحيوية
مواضيع عامة في المضادات الحيوية
مضادات البكتيريا
مضادات الفطريات
مضادات الطفيليات
مضادات الفايروسات
علم الخلية
الوراثة
الأحياء العامة
المناعة
التحليلات المرضية
الكيمياء الحيوية
مواضيع متنوعة أخرى
الانزيمات
استخلاص الDNA والRNA
المؤلف:
أ.د. علي حمود السعدي
المصدر:
مدخل الى تطبيقات الهندسة الوراثية في الطب العدلي
الجزء والصفحة:
ص119-121
2024-12-29
153
لا بد وفي أية تجربة يستخدم فيها الجين من الحاجة إلى مصدر يُستخلص منه الحامض النووي سواء كان DNA أو RNA، وتتضمّن الخطوة الأولى في عملية الاستخلاص تفتيت المادة الأولية سواء كانت فايروسية أو بكتيرية أو فطرية أو نباتية أو حيوانية، ولتجنّب تضرر الأحماض النووية المراد استخلاصها، يُفضّل استخدام الإنزيمات المحللة للجدار الخلوي (فيما يتعلق بالخلايا الحاوية على الجدار مثل الخلايا النباتية)، مع استعمال المنظفات الكيمياوية المحللة للأغشية الخلوية. هذا ويُراعى عند الضرورة استخدام طريقة أكثر قساوة في سبيل تمزيق الخلايا (كما هو الحال لبعض الأجزاء النباتية)، إذ إنه قد يتعرّض الـDNA للتقطيع، الأمر الذي قد يعيق إنتاج الجزيئات التركيبية النموذجية.
بعد عملية تمزيق الخلايا يتم التخلّص من البروتينات بالفينول أو خليط الفينول كلوروفورم مع الطرد المركزي، لتتجمّع الجزيئات البروتينية في طبقة الفينول الوسطى، وتتجمّع الأحماض النووية في الطبقة العليا للمحلول والتي يتم ترسيبها فيما بعد باستخدام الآيزوبروبانول (Isopropanol) أو الإيثانول المبرد خلال الطرد المركزي. في حالة استخلاص الـDNA يُستخدم الإنزيم Ribonuclease) RNase) للتخلّص من الRNA، أما في حالة استخلاص الmRNA بهدف تصنيع الDNA المكمّل (cDNA) فيتم استخدام أعمدة السليلوز المربوط مع سلاسل الثايمين القصيرة Oligo(dT)-cellulose التي ترتبط مع الذيل متعدّد الأدنين (Poly-A) الموجود في خيوط mRNA ، إذ يُعطي هذا الأسلوب كمية كبيرة من الmRNA ويُزيل أغلب المخلفات العالقة به .
هذا ويستخدم الطرد المركزي فائق السرعة (Ultracentrifugation) لتحضير ال DNA البلازميدي باستخدام محلول كلوريد السيزيوم( CsCl) Cesium chloride متدرّج الكثافة، وبعد فترة تصل إلى 48 ساعة يتكثف الـDNA البلازميدي ويكون طبقة في مكان محدد في أنبوبة الاختبار، إذ تؤخذ هذه الطبقة ويتم التخلص من بقايا كلوريد السيزيوم من أجل الحصول على DNA نقي.
أم البنين .. صانعة الوفاء وراعية الفضيلة
هل كان الشيخ الوائلي يعلم؟!
مخاطر سهولة النشر ومجانية التواصل
