إن أول ما يتم التفكير به لتحديد موقع الجين المطلوب هو معرفة الكروموسوم الذي يقع عليه هذا الجين. ويتم ذلك بنوع خاص من تهجين سوذرن دون اللجوء للخريطة الإنزيمية. وباستعمال كروموسومات سليمة يتم عزلها بإجراء ترحيل كهربائي خاص، ففي الترحيل الكهربائي العادي يُمرّر التيار الكهربائي خلال الهلام وتُرحل جزيئات الDNA في خط مستقيم باتجاه القطب الموجب (شكل 1) بحيث يمكن فصل الأحجام المختلفة بناءً على المسافات التي ترتحلها خلال الهلام. ولكن هذا الإجراء لا يصلح إلا للأحجام الجزيئية الصغيرة وليس للأحجام الكبيرة وخصوصاً التي يفوق حجمها الجزيئي 50 Kbp والتي يستعمل لها حقل كهربائي خاص مصمم يُطلق عليه الترحيل الكهربائي الهلامي متناوب الحقل المتعامد OFAGE (Orthogonal Field Alteration Gel Electrophoresis)، إذ يتناوب التيار بين زوجين من الأقطاب، كل زوج يصنع زاوية مقدارها 45 وينتج عن ذلك تيار نبضي تتحرك بموجبه الجزيئات في حركة نبضية وتغيّر اتجاهها بناءً على اتجاه التيار، بحيث يتناوب الحقلان بطريقة منتظمة، ويترتب عليه حركة الـDNA في الهلام تبدأ من أحد الأطراف إلى الطرف الآخر في خط مستقيم إلى حد ما، ولكن مع كل تغير في اتجاه الحقل الكهربائي يمر كل جزيء بزاوية 90 قبل أن يستأنف ترحيله (شكل 2).

        شكل (1) هُلام الأجاروز المعتاد

   شكل رقم (2) الترحيل الكهربائي بطريقة OFAGE

وتعد هذه الخطوة الركيزة في هذا الإجراء، وفيها يُعدل الجزيء القصير اتجاهه أسرع من الجزيء الطويل، ومن ثمّ يتقدّم الجزيء القصير باتجاه نهاية الهلام بسرعة أكثر، وتتكوّن مسافاتواضحة بحيث يمكن فصل الجزيئات الكبيرة مثل كروموسومات الخمائر والفطريات الخيطية والأوليات ( Protozoa) مثل طفيلي الملاريا.(Plasmodium falciparum) وتُعد تقنية الOFAGE والطرق الشبيهة الأخرى مثل إجراء الحقول الكهربائية الكنتورية المتشابهة

Contour clamped homogeneous electric field) CHEF) و Field invasion gel electrophoresis) FIGE) من الإجراءات المهمة للأسباب الآتية:

1- يمكن تنقية DNA الكروموسوم من الهلام وعمل سلسلة من المكتبات الجينية. وكل مكتبة من هذه المكتبات تحتوي على الجينات الممثلة لكروموسوم واحد، وتكون بلا شك صغيرة وسهلة التداول مقارنة بالمكتبة الجينومية الكاملة.

2. يمكن نقل جزيئات الDNA الكروموسومي إلى غشاء التهجين عن طريق نقل سوذرن (Southern transfer) وإجراء التهجين( Hybridization analysis) للتعرّف على الكروموسوم الذي يحمل الجين.

مواضيع ذات صلة

التباين في اطوال قطع التقييد (RFLP) Restriction fragment length polymorphism

دراسة تسلسل الDNA sequencing) DNA)

مجسات الحامض النووي (Nucleic acid probes)

Joining DNA Fragments

Cutting DNA with Restriction Enzymes

استعمال الPCR في دراسة كمية قليلة من الDNA

HUMAN GENOME PROJECT

عناصر استجابة الجين (المشجع أو الخامد) Gene response elements (Enhancer or Silencer)

انسياب المعلومات الوراثية Flow of genetic information

العاثي لمدا Lambda Phage

هندسة وراثية Genetic Engineering

المخثرات الميكروبية المهندسة وراثي Cloned Microbial Coagulants