الـ RFLP ويُلفظ رفلب (Rif-lip) هو التباين في تسلسل DNA الجينوم، والذي يمكن تحديده من خلال تقطيع الDNA إلى أجزاء بالإنزيمات القاطعة، وتحليل حجم القطع بوساطة الترحيل الكهربائي.

إن دراسة التغاير في الـRFLP يُعدُّ وسيلة مهمة في رسم الخرائط الجينومية، ومعرفة مواقع جينات الأمراض الوراثية، وتحديد خطورة المرض، وإجراء البصمة الوراثية، واختبارات الأبوة، والحالات الجنائية، من خلال تحديد مصدر عينة الDNA، فضلاً عن ذلك يستعمل RFLP في تحديد الحالة المرضية للفرد وتوصيف التغايرات الوراثية وأنماط التربية في المجاميع الحيوانية وفي قياس معدلات إعادة التشكيل (Recombination)، والتي يمكن أن تُفضي إلى رسم الخرائط الوراثية والمسافة الوراثية بين مواقع (RFLP (Loci محسوبة بالسنتيمورجان (CentiMorgan)، ويُستعمل أيضاً في دراسات تعقب الأسلاف خلال التطوّر والهجرة، إذ قد تحصل تنوعات في الطفرات تؤثر في جزيئات الDNA بطرق مختلفة.

يُشير مصطلح التباين (التنوع Polymorphism) إلى الاختلافات الطفيفة بين الأفراد في تسلسلات أزواج القواعد للجينات المشتركة، وعلى الرغم من أن كل أفراد النوع الواحد يمتلكون بشكل أساسي البنية الوراثية نفسها، فإن هذه الاختلافات الطفيفة تتمثل في الاختلافات المظهريّة( سواء كان المظهر الخارجي أو الأيض... الخ) بين الأفراد.

 تتضمن طريقة العمل قطع مناطق معينة من الـDNA ذات تغاير معروف بالإنزيمات القاطعة، ثم فصل القطع المتكوّنة بوساطة الترحيل الكهربائي على هلام الأجاروز، وإجراء وصمة سوذرن، وتحديد عدد القطع والحجوم النسبية، إذ يمكن أن يختلف نمط القطع من فرد لآخر.

وهنا يمكن أن يستعمل التحليل الذي يقيس قطع الـDNA التي تحتوي على تسلسلات قصيرة مختلفة من شخص لآخر، أو ما يُسمّى بالـ VNTRs. فبعد استخلاص الDNA من العينة وتضخيمها بالPCR ، تُضاف إنزيمات قاطعة تقطع في نقاط معينة من الDNA، وتُطبّق وصمة سوذرن، ويتم تحديد عدد المرات التي تتكرر بها الVNTRs ، فإذا ظهرت عينتان مختلفتان بسبب اختلاف أطوال VNTRs فهذا يعني أنهما لا تعودان للشخص نفسه. من جهةٍ أخرى إذا احتوت العينتان على أطوال VNTRs نفسها، فإنه من الممكن أن تعودان للشخص نفسه أو لشخصين يمتلكان VNTRs بالطول نفسه في ذلك الموقع. وعليه لا بُدَّ هنا من استعمال VNTRs كافية من الفردين، وذلك لتقليل احتمالية التوافق التطابقي إلى ما يُقارب الصفر. ومن الجدير بالذكر أن RFLP يحتاج إلى خطوات كثيرة، كما أن فترة إنجازه طويلة نسبياً، لذلك قد يُستعاض عنه بتقنيات أحدث وأسرع.

وقد ذكرنا أعلاه التركيز على RFLP لاستغلاله في تقديم معلومات قيمة في مجالات بيولوجية مختلفة، وربما كان جُل الاهتمام قد تركز على:

1- مسح وتنقيب DNA الإنسان حول وجود جينات ضارة بالصحة.

 2- تقديم دليل البراءة أو الاتهام في المشاكل الجنائية باستعمال بصمة الDNA.

في المثال التالي( شكل 1) يتبيّن بأن هنالك قطعة صغيرة من الجينوم يمكن تحديدها بالمجس (الخط السميك). ففي الأليل A يُقطع الجينوم بوساطة الإنزيم القاطع في ثلاثة مواقع متقاربة (مؤشّرة بالمثلثات)، ولكن سوف تظهر فقط القطعة الواقعة على أقصى اليمين بوساطة المجس. وفي الأليل a يُفقد موقع القطع الثاني بسبب طفرة وراثية، ولذلك فإن المجس يُحدّد قطعة أكبر مندمجة تبدأ من الموقع 1 إلى الموقع 3.

                      شكل رقم ( 1) اختلافات عدد مواقع القطع في أليلين

وعليه تظهر النتائج بعد تطبيق وصمة سوذرن كالآتي ( شكل 2 )

  شكل (2) اختلاف عدد الحزم المتكونة في تراكيب وراثية مختلفة بعد إجراء وصمة سوذرن بسبب اختلاف الـ RFLP

وفي المثال أدناه (شكل 3) فقد تمّ اختيار المجس والإنزيم القاطع لتحديد منطقة من الجينوم تتضمن تغاير في VNTR( مؤشّرة بهيأة صناديق). ففي الأليل c هنالك خمس مكررات في الVNTR والمجس يُحدّد قطعة أطول بين موقعي القطع. أما في الأليل d هنالك فقط متكررتان منها. وعليه يُحدّد المجس قطعة أصغر بين موقعي القطع نفسها.

شكل (3) اختلاف الطول في الحزم الواقعة بين موقعي القطع بسبب اختلاف عدد المتكررات من الـ VNTR

مع العلم بأن هناك عمليات وراثية أخرى مثل الاندغامات ( Insertions) والحذوفات ( Deletions) والانتقالات ( Translocations) والانقلابات ( Inversions) تؤدي أيضا الى RFLP.

ويبين الشكل (4) التباين بين عينتين بسبب اختلاف عدد مواقع القطع , إذ تظهر في العينة 1 ثلاث حزم , وفي العينة 2 حزمتين .

شكل (4) اختلاف عدد الحزم المتكونة في عينتين بسبب اختلاف مواقع القطع

مواضيع ذات صلة

فصل الكروموسومات بالترحيل الكهربائي

دراسة تسلسل الDNA sequencing) DNA)

مجسات الحامض النووي (Nucleic acid probes)

Joining DNA Fragments

Cutting DNA with Restriction Enzymes

استعمال الPCR في دراسة كمية قليلة من الDNA

HUMAN GENOME PROJECT

عناصر استجابة الجين (المشجع أو الخامد) Gene response elements (Enhancer or Silencer)

انسياب المعلومات الوراثية Flow of genetic information

العاثي لمدا Lambda Phage

هندسة وراثية Genetic Engineering

المخثرات الميكروبية المهندسة وراثي Cloned Microbial Coagulants