وهي الإنزيمات الذي تربط اثنين من المواد الأساس معا لتكوين أو أصر مع طاقة مشتقة من تحطيم بعض المركبات ذات الطاقة العالية مثل ATPوGTP وهي تعمل على تكوين اصرة معينه وتقسم حسب الأواصر المتكونة وهي الإنزيمات الذي تعمل على تكوين اصرة كربون - أوكسجين، كربون - كبريت، كربون - نتروجين كربون - کربون، ومن الأمثلة عليها هي:

E.C 6.1.1.7 alanyl-tRNA-synthetase

E.C 6.2.1.1 acetate Thiokinase

E.C 6.3.1.2 glutamine synthetase

E.C 6.4.1.1 pyruvate carboxylase

E.C 6.2.1.3 acyl CoA synthetase

E.C 6.2.1.4 succinate Thiokinase

E.C 6.4.1.2 acetyl-CoA carboxylase