الغرض من الاختبار Purpose

يستعمل هذا الاختبار للتمييز بين العصيات السالبة لصبغة كرام استنادا الى عملية نزع الكربوكسيل Decarboxylation او نزع الامين Deamination من اللايسين و تكوين كبريتيد الهيدروجين ( hydrogen sulfide H2S .

مبدأ الاختبار Principle

يحتوي وسط اكار اللايسين والحديد على اللايسين lysine ، بيتون Petones ، وكمية قليلة من الكلوكوز ، وسترات الأمونيوم الحديدية Ferric ammonium citrate ، ثايو كبريتات الصوديوم Sodium thiosulfate، يتكون الوسط من سطح مائل هوائي وقعر لا هوائي . عندما يتخمر الكلوكوز فان قعر الوسط يصبح حامضيا (اصفر)، اذ تنتج البكتيريا انزيم lysine decarboxylase يتكون cadaverine الذي يعادل الاحماض العضوية الناتجة من تخمر الكلوكوز ويتحول قعر الانبوب الى الحالة القاعدية (ارجواني). اما عدم انتاج انزيم decarboxylase فأن قعر الانبوب يبقى حامضي (اصفر). اما حدوث ازالة الامين التأكسدية للايسين فأن المركب الذي يتكون بوجود سترات الامونيوم الحديدية Ferric ammonium citrate ومساعد الانزيم Flavin mononucleotide يكون خمري (برغندي) اللون على السطح المائل . في حين عدم حدوث عملية ازالة الامين Deamination فأن السطح المائل للوسط يبقى ارجوانيا ان بروموكريزول الارجواني Bromocresol purple تعد كدليل على الاس الهيدروجيني اذ يكون اصفر اللون في اس هيدروجيني 5.2 اول اقل ويكون ارجوانيا في اس 6.8 او اعلى .

الوسط الزرعي Media

اذابة (5) غم من جيلاتين مهضوم انزیمیاً Enzymatic digest of gelatin ، (3غم) خلاصة الخميرة yeast  , extract , ( 1غم) دکستروز Dextrose , (10 غم ) L-lysine  , ( 0.5غم) سترات الامونيوم الحديدية Ferric ammonium citrate ,( 0.04غم ) ثايو كبريتات الصوديوم Sodium thiosulfate و(0.02 غم ) بروموكريزول الارجواني Bromocresol purple ، و( 13.5 غم ) اکار agar في كمية من الماء المقطر ويعدل الاس الهيدروجيني الى 6.7ثم يكمل الحجم إلى 1000 مل، ويعقم بجهاز المؤصدة بدرجة 121م وبضغط 15 باوند / انج² لمدة 15 دقيقة ثم وزع في انابيب وتترك بالشكل مائل لحين تصلبها ( ملاحظة: يفضل توزيع الوسط في انابيب ثم تعقم ).

 طريقة العمل Method

1- يلقح الوسط الزرعي اكار اللايسين والحديد بالطعن مرتين بناقل معدني مستقيم needle في قعر ومركز الانبوب ومن ثم يخطط السطح الوسط المائل الشكل 31-E.

 2- يغطى الانبوب بأحكام ويحضن بدرجة ( 35 - 37 ) م في ظروف هوائية لمدة (18 - 24 ) ساعة.

النتائج المتوقعة Expected Results

* سطح الوسط المائل قاعدي / قعر قاعدي (K/K) : حدوث lysine decarboxylation وعدم تخمر الكلوكوز. الشكل ( 31-A)

* سطح الوسط المائل قاعدي / قعر حامضي (K/A) : تخمر الكلوكوز الشكل ( 31-C)

* سطح الوسط المائل احمر / قعر حامضي (R/A) - حدوث lysine deamination و تخمر الكلوكوز.

* في حالة وجود راسب اسود دليل على تكون H2S الشكل (31-D)