الغرض من الاختبار Purpose

يستعمل هذا الاختبار للتمييز بين مجاميع البكتيريا Enterobacteriaceae, Clostridium, Staphylococcus, Neisseria التي تنتج أنزيم اللايبيز الذي يقوم بتحلل الدهون مانيا

مبدأ الاختبار Principle

تتكون الدهون او الكليسيرات الثلاثية من جزيئات الكليسرول التي ترتبط مع الاحماض الدهنية بوساطة اواصر الاستر ، تفرز بعض البكتيريا انزيمات تسمى lipases التي تجزئ الاحماض الدهنية من الجليسيرول ، الاحماض الدهنية والكليسرول تستعمل فيما بعد لأغراض التمثيل الغذائي مثل بناء الفوسفولبيد الذي يدخل في بناء الغشاء البلازمي او يستعمل لعمليات الهدم لإنتاج الطاقة . تحلل الدهون الثلاثية وتفكك الأحماض الدهنية إلى سلسلة قصيرة من الأحماض العضوية المتطايرة هي السبب في أن الدهون تصبح متزنخة. يحتوي وسط Spirit blue على البيتون كمصدر للكربون والنيتروجين والفيتامينات، كما أنه يحتوي على ترايبوترين ، وهو من الدهون الثلاثية الحيوانية الطبيعية البسيطة التي تستعمل كمادة اساس لعمل انزيم اللايبيز، وإطلاق الأحماض الدهنية من ترايبوترين عن طريق نشاط اللايبيز ينتج عنه انخفاض في الأس الهيدروجيني PH للوسط وتكون راسبا أزرق داكن اللون، ومع ذلك فإن بعض البكتيريا لاتحلل جميع الأحماض الدهنية من ترايبوترين ونتيجة لذلك لم يتم خفض الاس الهيدروجيني وتكوين راسب ازرق داكن اللون. في هذه الحالة, تحضر الاحماض الامينية بطريقتين :-

الوسط الزرعي (Blue Agar (Spirit Media

اذابة ( 20 غم ) من الاكار ، (10) غم ( كازائين مهضوم انزیمیا Pancreatic digest of casein ،( 5غم ) خلاصة الخميرة Yeast extract , (0.15) غم  Spirit Blue,  في كمية من الماء المقطر ويعدل الاس الهيدروجيني الى 6,8 ويكمل الحجم الى ( 970 مل) من الماء المقطر ويمزج جيدا ويسخن ببطء لحين الغليان ثم تعقم بالمؤصدة لمدة 15 دقيقة بدرجة 121م وبضغط 15 باوند /انج² ، وبعدها يبرد الى درجة (40 - 50 ) م . ويضاف (30 مل ) مستحلب الدهني Lipoidal emulsion معقم ، يمزج جيدا، ثم يصب في اطباق بتري معقمة مع التحريك المستمر للدورق للحفاظ على انتشار المستحلب ويحفظ في درجة 25 م .

تحضير المستحلب الدهني Lipoidal Emulsion

اضافة (0.1 مل) 80 Tween^TM الى (400 مل ) من الماء المقطر الدافئ deionized water ، يمزج جيدا ، يضاف (100مل ) من زيت القطن او زيت الزيتون يستحلب بالخلاط ثم يعقم بالمؤصدة لمدة 15 دقيقة بدرجة 121م وبضغط 15 باوند /انج² ، وبعدها يبرد الى درجة ( 40 - 50 ) م .

طريقة العمل Method

1- يلقح الطبق بالبكتيريا المراد اختبارها.

 2- يحضن الطبق لمدة ( 24 - 48 ) ساعة بدرجة حرارة (35) م.

3- يلاحظ تكون منطقة زرقاء حول النمو البكتيري دليل على التحلل الدهني, عدم تغير لون الوسط دليل على عدم تحلل الدهون مائيا

النتائج المتوقعة Expected Results

* النتيجة الموجبة : وجود منطقة زرقاء حول النمو البكتيري.

* النتيجة السالبة : يبقى لون المنطقة المحيطة بالنمو لون الوسط الزرعي

الوسط الزرعي Tributyrin Agar

أذابة (3 غم ) من خلاصة اللحم البقري Beef extract ، ( 5غم ) من الببتون Pepone ،(15 غم ) من الاكار ، واضافة (10) مل ) من Tributyrin oil في كمية من الماء المقطر ويعدل الأس الهيدروجيني الى (6.2-5.8) ثم يكمل الحجم الى 1000 مل ، ويعقم بجهاز المؤصدة بدرجة 121م وبضغط 15 باوند /انج² لمدة 15 دقيقة. وتصب في اطباق وتترك للتصلب

طريقة العمل Method

1- يلقح الطبق بالبكتيريا المراد اختبارها .

2- يحضن الطبق في وضع مقلوب لمدة ( 24 - 48 ) ساعة بدرجة حرارة (35) م ± (2) م .

3- يلاحظ تكون منطقة شفافة حول النمو البكتيري ، وعدم تكون منطقة شفافة يحضن الطبق اضافيا لمدة ( 24 - 48 ) ساعة بدرجة حرارة (35) م.

النتائج المتوقعة Expected Results

* النتيجة الموجبة : وجود المنطقة الشفافة حول النمو البكتيري.

 * النتيجة السالبة : عدم وجود المنطقة الشفافة حول النمو البكتيري .